上月底時，來自吉林大學的齊老師參與了我公司的優(yōu)惠活動，購買人凝血因子elisa試劑盒。日前，齊老師帶著一些相關產品使用的疑問咨詢到了錢經理：“請問，用于免疫接種的抗原應如何制備呢？” 錢經理答道：抗原應溶解在緩沖溶液。不溶性抗原和可溶性的一樣好。理想的抗原濃度是1mg/ml，然而較低濃度也可以接受的。您也可以把含有目標蛋白的SDS-PAGE膠發(fā)給我們，將膠放于水中變脫色，因為醋酸能使得蛋白質進一步地變性。
對此，還要注意避免：對動物有毒的添加劑。可接受：低量的SDS、咪唑、尿素、胍，非離子型去污劑，EDTA或EGTA和聚丙烯酰胺。添加的*終的量在很大程度上取決于樣本體積/抗原濃度。
齊老師繼續(xù)問道：“選擇哪個物種用于免疫接種？”
使用IgG和IgY抗體針對同一抗原的優(yōu)勢：①獨立確認預期的目標蛋白質被檢測。②抗體庫具有不同的特性，在不同的技術中能起到互補的作用雙重染色。③一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠的親源關系的物種用于免疫接種。 回答了以上兩個問題之后，齊老師這些又問出了四個常見問題，上海恒遠錢經理都一一仔細回復。
1. 問：在我開始實驗前可以測試來源于一些動物的免疫前血清或卵黃嗎？
答：按照您的要求，在您開始您的實驗前Agrisera會送你幾個免疫前血清或卵黃樣品。您可以選擇具有背景信號的動物用于測試。
2. 問：在兔子中生產的抗體比那些在雞中生產的更好嗎？
答：生產抗體的過程是抗原，特異動物免疫反應和測試的結合。如哺乳動物的保守靶標蛋白，我們推薦使用在雞中生產的抗體。因為他們在進化上親緣關系更遠，且他們的免疫系統(tǒng)與保守的哺乳動物蛋白反應更好，而這些保守哺乳動物蛋白可能不會被山羊或兔子的免疫系統(tǒng)識別。
3. 問：如果我的抗體在免疫定位試驗中成功了，是否該抗體在免疫印跡和其它的試驗中也能用呢？
答：再次強調，它取決于抗體識別蛋白質的哪一部分和在固定后或免疫印跡后蛋白的哪一部分暴露了。如果多克隆抗體是合成肽，它能識別抗原池，如果這類抗原固定后沒有暴露，抗體將不會識別抗原。在某些情況下在緩沖液中加入6-8M尿素有助于蛋白質的暴露。
4. 問：如何儲存抗體？
答：血清中的抗體，對于抗體這是一個非常穩(wěn)定的存儲形式。在-20℃或-70℃的血清通常可以保存多年。在一些特殊的情況下，anti-peptide抗體儲存的時間更短。短時間可以儲存在4℃。在某些情況下操作要更加小心，步在-20℃冷凍，之后放于-70℃冷凍的效果更好。
上海恒遠給出的常規(guī)建議：
① 對于較大體積的親和純化抗體，濾滅的抗體樣本和分成等份的液體避免多次凍融。
② 存儲蛋白質的濃度在0.5-1mg/ml。
③ 檢查蛋白質在不同儲存條件下的穩(wěn)定性，尤其是IgM。
錢經理為客戶解說ELISA抗體的六大常見問題，齊老師對我司的售后服務贊不絕口。非常感謝吉林大學齊老師對我公司的大力支持！
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